▎技术原理 :
RNA临近标记实验(RNA proximity labeling)是一种用于研究RNA与其相互作用分子之间空间关系和相互作用的实验方法。第一时间将兴趣RNA的DNA序列构建至两侧含有BoxB茎环的载体上,而后利用与BoxB茎环高度亲和的λN 肽与生物素连接酶融合表达(RaPID),使BoxB茎环募集RaPID蛋白将目标RNA侧翼邻近的RNA结合蛋白发生生物素化,而后利用链霉亲和素捕获基序结合蛋白,顺利获得质谱分析邻近目标RNA分子附近的RNA结合蛋白。
▎技术优势 :
● 高特异性:采用改良的生物素连接酶对邻近RBP生物素化,允许严格的洗涤环境降低背景;
● 更天然生理:标记过程在活细胞内进行,保留了天然蛋白的活性,避免了因裂解导致的相结构的重新分配;
● 空间分辨率:该方法保留RNA及其相互作用伙伴在细胞内空间分布的信息;
● 应用范围广:适用于多种类型的RNA(如mRNA、非编码RNA),能够探索RNA的多重功能及其调控网络。
▎原理示意图 :

▎客户给予 :
① 目的RNA的具体信息
② 样本:活细胞(T25号瓶大于40%)或冻存细胞(至少两管)
良好生长状态的实验细胞,适宜培养的条件(冻存细胞需用干冰进行运输,培养中的细胞样品使用装有培养基的培养瓶寄送,瓶口用封口膜密封)。
▎服务流程 :

▎服务说明 :

▎结果交付 :
① 基因合成相关数据及图片(测序和双酶切);
② 生物素标记效率Blot检测结果;
③ Pull down蛋白银染胶图;
④ 质谱下机数据及个性化生信分析(PPI、蛋白GO/KEGG富集分析);
⑤ 原始数据及原始图片,剩余实验材料;
⑥ 标准的项目结题报告。
▎案例展示 :

▎服务保障 :




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